DIY رخيصة GFP (البروتين الأخضر الفلورسنت) المنور - 💡 Fix My Ideas

DIY رخيصة GFP (البروتين الأخضر الفلورسنت) المنور

DIY رخيصة GFP (البروتين الأخضر الفلورسنت) المنور


مؤلف: Ethan Holmes, 2019

لم يكن الأمر بمثابة صنم زاحف دفعني إلى قراءة جريدة The Worm Breeder.بدلاً من ذلك ، كان يتحدث إلى كاثرين هيدجز - عالمة وفنان ذكية وعاطفية وذات مصداقية جيدة - حول الجريدة نصائح حول صنع إضاءة GFP بسعر رخيص. GFP ، أو بروتين الفلورسنت الأخضر ، هو علامة فلوري تستخدم بشكل متكرر في البيولوجيا الجزيئية وعلم الأعصاب.

خلال برنامج الماجستير في جامعة هومبولت ستيت ، واجهت كاثرين ، مثل العديد من الباحثين العلميين الآخرين ، تحديًا بتخفيضات الميزانية وصعوبة العثور على دعم المنح. من أجل مواصلة عملها على الخلايا العصبية الخيطية في قسم يعاني من ضائقة مالية عندما كانت تحتاج إلى الساعة 11 للحصول على معدات جديدة ، أطلقت كاثرين العنان لقوتها "دعونا نرى كيف يمكننا أن نفعل هذا عقلية أفضل وأرخص" لاختراق DIY إضاءة GFP في نظام أفضل وجدير بالبحث ، قادر على تصور الخلايا العصبية في الديدان الصغيرة بطول 1 ملليمتر فقط.

لماذا كان هذا مهم لكاثرين؟ على حد تعبيرها ، "لقد استمرت إحدى سلالاتي في الاختيار مقابل GFP إذا لم أختر يدويًا أحلك الدود في كل جيل. بدون طريقة لرؤية GFP على المجهر "تشريح" حيث كنت التقاط الديدان الفردية مع ملعقة صغيرة من الأسلاك ، لا أستطيع أن أضمن أن جميع ذريتهم ستكون الفلورسنت ، وهي مشكلة عندما أحاول معرفة ما إذا كان العلاج يضر بهم لجعلهم يفقدون مضانه. "

النتيجة: "كانت المجاهر الوحيدة التي كانت لدينا مع قدرة GFP غير مناسبة لتكبير حجم الديدان أثناء نقلها ، وشراء نطاق مناسب سيكلف آلاف الدولارات. لقد بقي مبلغ 750 دولارًا في ميزانيتي ، لذا فقد أنفقت حوالي 80 دولارًا على أجزاء LED وقمت بإنشاء مصباح إضاءة. لم يكن مشرقًا بدرجة كافية لرؤية خلايا رقيقة طويلة ، لذا فقد أنفقت 825 دولارًا على فلاتر عالية الجودة ، وقمت بإنقاذ عدسة مجهرية قديمة كعدسة تركيز ، واستخدمت تركيبات السباكة لتثبيتها على مجهر دقيق في المختبر. بعد ذلك ، استطعت تحديد ديني اللامع ، ورفع يرقات الديدان اللامعة بشكل موثوق ، وإنهاء تجاربي. إذا كنت أتتبع ميزة أكبر في GFP ، أو كنت أستخدم Red Fluorescent Protein ، فمن المحتمل أنني لم أكن قد استخدمت مرشحات رخيصة وفعلت كل شيء بأقل من 100 دولار. إذا كنت ترغب في مواصلة تجاربي ، فيمكنني استخدام هذا المنور عند عبور سلالات GFP لمعرفة أي ذرية لها علامات GFP. "

شجع مستشار أطروحة كاثرين هذا النوع من التجارب ، حيث طور هو ومستشار أطروحته معدات DIY الخاصة بهما للكشف عن سرعة توصيل الأعصاب في ملف صغير للمياه العذبة. لا يزال النموذج الأولي معلقًا على لوحة إعلانات فوق مكتبه. لا يقوم فقط بتدريس طلاب فسيولوجيا الحيوان كيفية القيام بعلم وظائف الأعضاء العصبية بشكل غير موسع ، فقد قام هو وطلاب بحثه بنشر أوراق باستخدام هذه الطريقة لجمع البيانات. إنه من محبي Backyard Brains Spiker Box ويأمل أن يراها تعمل.

من خلال اختراق أداتها الخاصة ، دون أن تتحمل نفقات مرتفعة للغاية لشراء إضاءة متوسطة بآلاف الدولارات (حتى المستخدمة) ، كانت كاثرين قادرة على إنهاء أطروحتها. يُعد المنور مفيدًا لأي من علماء DIY الذين يحتاجون إلى عرض التعبير عن جينات GFP أو RFP (البروتين الفلوري الأحمر) في البكتيريا أو c. ايليجانس. وكاثرين هو دليل على أنه يمكنك القيام بذلك على عشرة سنتات.

تفاصيل عن إضاءة GFP الأساسية من The Worm Breeder’s Gazette هي أدناه (بعد القفزة). لمعرفة المزيد حول تحسينات Kathryn ، ولمعرفة ملاحظاتها على الديدان ، تحقق من مشاركتها على ألوان رائعة.

[الائتمان لإيان تشين سانغ وويى تشونغ]

استخدام المصابيح كمصدر منخفض التكلفة للكشف عن GFP و DsRED

إيان تشين-سانغ 1 وويوي تشونغ قسم الأحياء ، جامعة كوينز ، كينغستون ، أونتاريو ، كندا ، قسمان للكيمياء الحيوية وبيولوجيا الخلية ، جامعة رايس ، هيوستن تكساس ، المراسلات إلى: ويوي تشونغ ([البريد الإلكتروني محمي])

مكونات الكشف عن الإسفار مكلفة للغاية بحيث لا يمكن تثبيتها في كل مجسمة. غالبًا ما تكون علاماتنا الفلورية ساطعة جدًا ولا تتطلب السعة الكاملة لمثل هذه المعدات. نقدم هنا إعداد LED يكلف حوالي 100 دولار فقط ويمكنه اكتشاف علامات الفلورسنت الساطعة مثل myo-2 :: GFP. يتكون الإعداد (الشكل 1) من:

  • X-acto تساعد الأيدي أو أي شيء يمكن أن يضع مؤشر LED (Amazon.com)
  • سلك المصباح الذي يحتوي على مفتاح (متجر الأجهزة المحلية)
  • برنامج تشغيل Xitanium LED بقدرة 17 واط (وحدة تزويد LED)
  • موصل برنامج تشغيل Xitanium (LED LED)
  • غرفة التبريد (الصمام العرض)
  • عدسة موضعية (LED LED)
  • حامل البصريات Luxeon V Star (LED LED)
  • مصباح LED باللون الأزرق الملكي Luxeon V Star للكشف عن GFP (مصدر LED) ، أو مصباح Luxeon V Star LED الأخضر للكشف عن dsRED (مصدر LED)
  • مرشح إثارة اختياري: Roscolux # 4290 CalColor 90 Blue لـ GFP ، أو # 389 Chroma Green for dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • مرشح الانبعاثات: Roscolux # 12 Straw for GFP ، أو # 19 Fire for dsRED (توفر نفس مرشحات الإثارة)

يمكن العثور هنا على تفاصيل حول كيفية وضع هذا الجهاز معًا بالفعل.

الشكل 1. الإعداد الصمام

الشكل 2. استخدام إعداد LED للكشف عن myo-2 :: GFP في حيوان mIn1.

الشكل 3. استخدام إعداد LED للكشف عن myo-2 :: dsRED.

عند تجميع مؤشر LED في برنامج التشغيل ، تأكد من أن علامة +/- تنتهي على مؤشر LED وأن الخطوط المحايدة / الموجودة على سلك المصباح تطابق تلك الموجودة على برنامج التشغيل. استخدم غراء غير موصل مثل لاصق السيليكون (Devcon ، الجزء رقم 12045 ، متجر الأجهزة المحلي) لوضع حامل العدسة على مؤشر LED. يمكن لصقها على مرشح الإثارة من خلال تطبيق كمية صغيرة من الغراء على الحافة. يمكن ببساطة تصفية مرشح الانبعاثات تحت هدف المجهر.

يتمتع هذا الإعداد بعمر تشغيل طويل ، ولا يتطلب وقتًا للإحماء أو للتهدئة ، ولا يوجد به أي إشعاع. ومع ذلك ، فإنه يمكن فقط الكشف عن إشارات قوية. لقد استخدمنا الإعداد للكشف عن العلامات التالية: myo-2 :: GFP (الشكل 2) ، sur-5 :: GFP ، ajm-1 :: GFP ، و myo-2 :: dsRED (الشكل 3).

استخدام المصابيح كمصدر منخفض التكلفة للكشف عن GFP و DsRED


Bio: Eri Gentry هو رائد في مجال التكنولوجيا الحيوية ، ومنظم مجتمع مجتمع العلوم ، والمؤسس المشارك لـ BioCurious ، أول قرصنة للتكنولوجيا الحيوية ، في منطقة خليج سان فرانسيسكو.



قد تكون مهتمة

هيثكيت هيرو

هيثكيت هيرو


الطباعة ثلاثية الأبعاد بدون تثبيت الشرائح

الطباعة ثلاثية الأبعاد بدون تثبيت الشرائح


أعضاء TechShop يشقون طريقهم إلى صانع البيت الأبيض

أعضاء TechShop يشقون طريقهم إلى صانع البيت الأبيض


Qtechknow يعرف البيت الأبيض

Qtechknow يعرف البيت الأبيض